Visualización del VHC en biopsias de hígado de
pacientes con recurrencia de la infección tras el trasplante hepático.
La hepatitis C es la indicación más frecuente de trasplante hepático (TH)
en nuestro medio. La infección del injerto es universal en pacientes que llegan
al trasplante con carga viral detectable, y una proporción significativa de estos
desarrollan una hepatitis crónica que culmina
en cirrosis y fallo hepático.
Poder ver el virus en el hígado tiene especial relevancia para el
diagnóstico de la recurrencia de la infección así como para el manejo clínico
de la enfermedad y la toma de decisiones terapéuticas asociadas. Asimismo,
podría aportar información importante referente al ciclo de vida del VHC y la
respuesta del hospedador, incluyendo la localización del virus y la relación
entre los sitios de replicación del virus y dónde se produce el daño hepático.
En este trabajo nos propusimos analizar la presencia del virus en biopsias
hepáticas de pacientes con recidiva de la infección. Nos centramos en el marco del TH puesto que
nos permitía disponer de: 1) la muestra de reperfusión, que nos sirvió de
control negativo puesto que se adquiere justo después de la revascularización
del nuevo órgano (cuando la replicación del virus aún no ha empezado) y 2) la
muestra de fase aguda, adquirida cuando los pacientes hacen un pico de carga
viral debido a los tratamientos de inmunosupresión administrados (lo que
permite aumentar la probabilidad de detectar el virus). En concreto analizamos
mediante técnicas de inmunofluorescencia y microscopia confocal la presencia de
dos proteínas virales: core (proteína estructural de la nucleocápside viral) y
NS5A (proteína no estructural involucrada en la replicación del VHC) y lo
relacionamos con parámetros histopatológicos de inflamación y daño hepático.
También llevamos a cabo el análisis en 3D de células individuales para
determinar la distribución relativa de las proteínas del virus y su relación con
las lípid droplets (LD), estructuras lipídicas de la célula hospedadora donde se produce la replicación y ensamblaje de las
partículas virales infecciosas.
Los resultados obtenidos muestran que las proteínas del virus se expresan
aleatoriamente en el citoplasma de los hepatocitos y que existe una correlación
significativa entre los niveles de la proteína del core vs. las enzimas hepáticas y la
actividad inflamatoria, es decir, daño hepático. Además, demostramos por primera vez in vivo la colocalización de NS5A alrededor
de las LD, lo que confirma el rol de estas estructuras en la replicación y producción de partículas
del VHC.
