La adaptación del Virus de la Hepatitis A al silenciamiento celular implica ajustes en el uso de codones y conduce a la selección de poblaciones vitales con cápsidas alteradas.
El
Virus de la Hepatitis A (HAV) posee un uso de codones altamente deoptimizado,
un IRES muy ineficiente y es incapaz de inhibir la síntesis proteica celular.
Como consecuencia la traducción de su genoma es muy lenta.
Hemos
adaptado la cepa salvaje del HAV a replicar a distintos niveles de silenciamiento
celular (shut-off) inducido artificialmente mediante la utilización de
diferentes concentraciones de Actinomicina D (AMD). La AMD inhibe
específicamente la síntesis de mRNA celular sin afectar la transcripción
vírica. Con este procedimiento se han seleccionado 10 poblaciones distintas que
han sido caracterizadas a nivel genómico, antigénico y biológico. Así de forma
genérica se ha detectado una re-deoptimización del uso de codones de la región
codificante de la cápside durante la adaptación al silenciamiento celular, la
cual ha inducido un cambio conformacional de la misma con una menor exposición
del epítopo reconocido por el anticuerpo monoclonal (MAb) K24F2 y una mayor
exposición de los epitopos reconocidos por los MAbs K34C8 y H7C27. A su vez
estos cambios dan lugar a cápsides mucho más susceptibles a condiciones
extremas de temperatura y pH a diferencia de la población parental que es
altamente resistente. Por otro lado estos cambios conformacionales se asocian a
cambios en el proceso de entrada celular. Así las dos poblaciones adaptadas a
condiciones de alto silenciamiento celular exhiben tiempos de desencapsidación
muy cortos de tan sólo 4 y 8 horas para la desencapsidación del 50% de las
partículas (UT50) comparado con las 18 horas de la población
parental del HAV. Como consecuencia estas poblaciones producen calvas de gran
diámetro (0.70 cm) comparado con la población parental (0.20 cm).
Estas poblaciones, pues, abren nuevas
perspectivas para el estudio del ciclo biológico del HAV, gracias a su fenotipo
de más rápida replicación, como son los procesos de entrada y salida celular.
Ello puede ser de gran interés para estudiar en profundidad el mecanismo de
salida por exocitosis del HAV, descrito recientemente por el grupo de Stanley
Lemon de la Universidad de Carolina del Norte, y que representa un cambio de
paradigma puesto que genera cápsides envueltas de un picornavirus.
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